常說(shuō)的過(guò)柱子應(yīng)該叫柱層析分離，也叫柱色譜。我們常用的是以硅膠或氧化鋁作固定相的吸附柱。由于柱分離的經(jīng)驗(yàn)成分太多，所以下面我就幾年來(lái)過(guò)柱的體會(huì)寫些心得，希望能有所幫助。
1．吸附劑  

常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、氧化鎂、碳酸鈣和活性炭等：吸附劑一般要經(jīng)過(guò)純化和活性處理，顆粒大小應(yīng)當(dāng)均勻。對(duì)吸附劑來(lái)說(shuō)粒子小、表面積大，吸附能力就高，但是顆粒小時(shí)，溶劑的流速就太慢，因此應(yīng)根據(jù)實(shí)際分離需要而定。供柱色譜使用的氧化鋁有酸性、中性和堿性3種。酸性氧化鋁是用1％鹽酸浸泡后，用蒸餾水洗**氧化鋁的懸浮液pH為4，用于分離酸性物質(zhì)；中性氧化鋁的pH約為7．5，用于分離中性物質(zhì)；堿性氧化鋁的pH約為10，用于胺或其它堿性化合物的分離。  

因硅膠略帶酸性，只能用于對(duì)酸不敏感的化合物的分離。常用300-400目的柱硅膠或H硅膠。若化合物的Rf值相差較大，則可考慮使用２00-３00目硅膠以加快層析速度。另：因吸附劑的比表面較大，天氣潮濕時(shí)或長(zhǎng)期放置中吸附的水分會(huì)對(duì)分離效果產(chǎn)生極大的影響（相當(dāng)于大大增加了固定相的極性導(dǎo)致樣品分不開(kāi)），因此應(yīng)將吸附劑放入９０～１００度烘箱內(nèi)烘２小時(shí)后，取出在干燥器中冷卻后再使用。使用的硅膠，不用時(shí)一定要密封，防止吸潮。TLC所用的硅膠板一定要保存在干燥器里面，或使用前在紅外烘箱里干燥一段時(shí)間。  

2．溶質(zhì)的結(jié)構(gòu)與吸附能力的關(guān)系  

化合物的吸附性與它們的極性成正比，化合物分子中含有極性較大的基團(tuán)時(shí)，吸附性也較強(qiáng)，氧化鋁對(duì)各種化合物的吸附性按以下次序遞減：  

酸和堿>醇、胺、硫醇>酯、醛、酮>芳香族化合物>鹵代物、醚>烯>飽和烴3．柱子可以分為：加壓，常壓，減壓。  

壓力可以增加淋洗劑的流動(dòng)速度，減少產(chǎn)品收集的時(shí)間，但是會(huì)減低柱子的塔板數(shù)。所以其他條件相同的時(shí)候，常壓柱是效率**高的，但是時(shí)間也**長(zhǎng)，比如天然化合物的分離，一個(gè)柱子幾個(gè)月也是有的。  

加壓柱是一種比較好的方法，與常壓柱類似，只不過(guò)外加壓力使淋洗劑走的快些。壓力的提供可以是壓縮空氣，雙連球是常用的手動(dòng)加壓的方法。特別是在容易分解的樣品的分離中適用。壓力不可過(guò)大，不然溶劑走的太快就會(huì)減低分離效果。個(gè)人覺(jué)得加壓柱在普通的有機(jī)化合物的分離中是比較適用的。  

體會(huì)：過(guò)柱時(shí)是否加壓要具體分析，通常情況下直徑比較粗的柱子用常壓即可，因其橫截面積的緣故淋洗劑的流速已足夠快。通常控制柱子下端液體流速大約在0.5~1滴每秒的范圍比較合適。  

減壓柱能夠減少硅膠的使用量，感覺(jué)能夠節(jié)省一半甚**更多，但是由于大量的空氣通過(guò)硅膠會(huì)使溶劑揮發(fā)（有時(shí)在柱子外面有水汽凝結(jié)），以及有些比較易分解的東西可能得不到，而且還必須同時(shí)使用水泵抽氣（很大的噪音，而且時(shí)間長(zhǎng)）。一般不推薦使用。
3.柱子的尺寸  

從理論上講應(yīng)該是粗長(zhǎng)的好。柱子長(zhǎng)了，相應(yīng)的塔板數(shù)就高。柱子粗了，上樣后樣品的原點(diǎn)就?。ǚ从吃谥由暇褪菢悠穼颖容^?。?，這樣相對(duì)的減小了分離的難度。試想如果柱子十厘米，而樣品就有二厘米，那么分離的難度可想而知，恐怕要用很低極性的溶劑慢慢沖了。而如果樣品層只有0.5厘米，那么各組分就比較容易得到*分離了。當(dāng)然采用粗大的柱子要犧牲比較多的硅膠和溶劑了，不過(guò)這些成本相對(duì)于產(chǎn)品來(lái)說(shuō)也許就不算什么了。  

現(xiàn)在見(jiàn)到的柱子徑高比一般在1：5～10，書(shū)中寫硅膠量是樣品量的30～40倍，若需要時(shí)可增**100倍，具體選擇要具體分析。如果所需組分和雜質(zhì)分的比較開(kāi)（是指在所需組分Rf在0.2～0.4，雜質(zhì)相差0.1以上），就可以少用硅膠，用小柱子（例如200毫克的樣品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我覺(jué)得可以增加柱子的長(zhǎng)度，也可以減小淋洗劑的極性等等。  

細(xì)長(zhǎng)柱子可以增加塔板數(shù)，但是也會(huì)增加過(guò)柱的時(shí)間使樣品在固定相中擴(kuò)散影響分離效果。
4．溶劑  

溶劑的選擇是重要的一環(huán)，通常根據(jù)被分離物中各種成分的極性、溶解度和吸附劑的活性等來(lái)考慮先將要分離的樣品溶于一定體積的溶劑中，選用的溶劑極性應(yīng)低，體積要小。如有的樣品在極性低的溶劑中溶解度很小，則可加入少量極性較大的溶劑，使溶液體積不致太大。樣品的展開(kāi)首先使用極性較小的溶劑，使**容易脫附的組分分離。然后加入不同比例的極性溶劑配成的洗脫劑，將極性較大的化合物白色譜柱中洗脫下來(lái)。常用洗脫劑的極性按如下次序遞增：  

己烷和石油醚<環(huán)己烷<四氯化碳<三氯乙烯<二硫化碳<甲苯<苯<二氯甲烷<氯仿<**<乙酸乙酯<丙酮<丙醇<乙醇<甲醇<水<吡啶<乙酸  

常選用石油醚，乙酸乙酯。正己烷價(jià)格比較高。使用**、二氯甲烷等沸點(diǎn)較低的溶劑時(shí)，它和硅膠的吸附是一個(gè)放熱過(guò)程，特別是夏天的時(shí)候經(jīng)常會(huì)在柱子里產(chǎn)生氣泡，天氣冷的時(shí)候會(huì)好一些。由于硅膠中的活性羥基，用甲醇可能會(huì)洗下來(lái)一些硅膠中的東西，所以產(chǎn)品如果想過(guò)元素分析的話要留神，應(yīng)該經(jīng)過(guò)后繼處理，比如說(shuō)重結(jié)晶等。